以下是針對尺寸排阻色譜(SEC)色譜柱的專業(yè)清潔方法總結，涵蓋清洗原理、操作步驟及注意事項：

　　一、SEC色譜柱的污染類型與識別

　　1. 離子性吸附

　　- 表現(xiàn)：峰形拖尾、保留時間漂移。

　　- 原因：樹脂基質中羧基帶負電，與樣品中陽離子結合。

　　2. 疏水性吸附

　　- 表現(xiàn)：壓力升高、峰容量下降。

　　- 原因：苯環(huán)類化合物或疏水性蛋白吸附于填料表面。

　　3. 復合污染

　　- 特征：同時存在離子性和疏水性吸附，需聯(lián)合清洗。

　　二、針對性清洗方法

　　(一)樹脂基質色譜柱

　　1. 離子性污染清洗

　　- 溶劑選擇：1 mol/L醋酸緩沖液(pH 4.0)或含0.5 mol/L NaCl的水溶液。

　　- 操作：以0.5 mL/min流速反向沖洗10–15倍柱體積。

　　2. 疏水性污染清洗

　　- 強效溶劑：PW·PL系列用50%甲醇，α/SuperAW系列用純乙腈。

　　- 注意：逐步提高有機相比例，避免填料收縮變形[。

　　3. 頑固蛋白殘留

　　- 特殊試劑：6–8 mol/L尿素溶液或0.2% Triton X-100表面活性劑。

　　- 風險提示：清洗后需徹洗，防止試劑殘留影響后續(xù)分析。

　　(二)硅膠基質色譜柱

　　1. 堿性物質污染

　　- 酸性清洗：0.1%磷酸/乙腈混合液(pH 2.5–3.0)，沖洗5–10倍柱體積。

　　2. 疏水性物質污染

　　- 梯度洗脫：從10%甲醇逐步升至30%，避免鹽析現(xiàn)象。

　　三、標準化清洗流程

　　1. 預處理

　　- 斷開檢測器連接，防止污染物進入流通池。

　　- 反接色譜柱(入口→出口方向反轉)，降低篩板堵塞風險。

　　2. 分段沖洗

　　- 第一階段：純水或緩沖液沖洗10倍柱體積，去除水溶性雜質。

　　- 第二階段：根據(jù)污染類型選擇專用清洗劑，流速≤50%最大耐壓值。

　　- 第三階段：純溶劑置換殘留清洗劑，例如甲醇→水的梯度過渡。

　　3. 效果驗證

　　- 測試標準品(如葡聚糖)的峰對稱性和理論塔板數(shù)。

　　- 空白進樣確認無鬼峰，表明污染物已清除。

　　四、關鍵注意事項

　　1. 流速控制

　　- 初始沖洗流速≤0.5 mL/min，逐步提升至正常分析流速。

　　2.溶劑兼容性

　　- 避免使用THF等強溶劑長期浸泡聚甲基丙烯酸酯填料。

　　- pH范圍限制：硅膠基質需維持pH 2–8，防止結構溶解。

　　3. 滅菌與長期保存

　　- 短期存放(<7天)：150 mM磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)。

　　- 長期封存：含0.05%疊氮化鈉的20%乙醇溶液，抑制微生物生長。

　　五、預防性維護建議

　　1. 進樣前過濾：使用0.22 μm濾膜去除顆粒物。

　　2. 定期再生：每完成100次分析后執(zhí)行基礎清洗程序。

　　3. 壓力監(jiān)控：當系統(tǒng)壓力較初始值升高30%時啟動深度清洗。

　　通過上述系統(tǒng)化維護策略，可顯著延長SEC色譜柱使用壽命并保持分離性能穩(wěn)定。